Cytokeratin 18 Double Nickase Plasmid (h): sc-400305-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cytokeratin 18 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cytokeratin 18 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cytokeratin 18 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KRT18 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cytokeratin 18: sc-32329
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cytokeratin 18 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400305-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 18 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400305-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT18 kodiert Zytokeratin 18, ein Intermediärfilament-Protein vom Typ I, das mit Keratin 8 zu Heteropolymeren assembliert und so das zentrale Zytoskelett-Netzwerk einfacher Epithelzellen bildet. Zytokeratin 18 trägt zur mechanischen Stabilität der Zelle, zur Positionierung von Organellen und zur epithelialen Polarität bei und wird während der Mitose sowie bei Stressantworten durch phosphorylierungsabhängige Umorganisation der Filamente dynamisch umgebaut. Es ist an apoptoseassoziierten Veränderungen des Zytoskeletts beteiligt, einschließlich einer durch Caspasen vermittelten Spaltung, die die Integrität und Signalweiterleitung in Epithelzellen beeinflussen kann. Veränderungen in der KRT18-Expression, der Filamentorganisation oder den Spaltungsmustern wurden mit epithelialen Schädigungen und einer Reihe pathologischer Zustände in Verbindung gebracht, weshalb KRT18 häufig als Marker und als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zur epithelialen Homöostase und Stressantwort dient.
Cytokeratin 18 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KRT18-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KRT18 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KRT18-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KRT18-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.