Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400305

Übersicht

KRT18 kodiert Zytokeratin 18, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ I, das zusammen mit Keratin 8 heteropolymerisiert und den zentralen Zytoskelett‑Grundaufbau einfacher Epithelzellen bildet. Dieses Filamentsystem stützt die Zellarchitektur und mechanische Widerstandsfähigkeit und ist mit Zell‑Zell‑Kontakten, der Positionierung von Organellen sowie Stressantwort‑Signalwegen verknüpft, die den Zellzyklusverlauf und die Apoptose koordinieren. Die Dynamik von Zytokeratin 18 wird durch Phosphorylierung und proteolytische Prozessierung reguliert, wodurch es an die Umgestaltung des Zytoskeletts während der Mitose und bei zellulärem Stress gekoppelt ist. Eine fehlregulierte KRT18‑Expression oder Filamentorganisation wird häufig als Marker des epithelialen Zustands verwendet und in Zusammenhängen wie epithelialer Schädigung, Entzündung und Tumorzellbiologie untersucht.

Das Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KRT18-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KRT18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KRT18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cytokeratin 18-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KRT18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cytokeratin 18-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KRT18-Exone abzielen, die für die Cytokeratin 18-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KRT18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KRT18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cytokeratin 18 HDR-Plasmid (h) und Cytokeratin 18 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KRT18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KRT18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.