Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 15: sc-401869-NIC

KRT15 codifica la citoqueratina 15, una proteína de filamento intermedio de tipo I enriquecida en queratinocitos basales y en compartimentos de progenitores epiteliales, donde contribuye a la integridad del citoesqueleto y a la resiliencia tisular. La citoqueratina 15 participa en el ensamblaje de los filamentos intermedios y se intercomunica con complejos de adhesión desmosomales y hemidesmosomales, influyendo en la adhesión célula–célula, la polaridad y los programas de migración. En la piel y los epitelios estratificados, la expresión de KRT15 se utiliza comúnmente para estudiar la dinámica de las células madre, la diferenciación epidérmica y los procesos de reparación de heridas. Las redes de queratinas desreguladas, incluidos patrones alterados de expresión de KRT15, se asocian con respuestas de estrés epitelial y se han investigado en contextos de hiperproliferación, inflamación y biología tumoral.

Cytokeratin 15 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT15 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT15. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT15. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT15 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.