Cytokeratin 15 Double Nickase Plasmid (h): sc-401869-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cytokeratin 15 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cytokeratin 15 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cytokeratin 15 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KRT15 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cytokeratin 15: sc-47697
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cytokeratin 15 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 15 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT15 kodiert Zytokeratin 15, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ I, das in basalen Keratinozyten und epithelialen Vorläuferkompartimenten angereichert ist und dort zur zytoskelettalen Integrität und Gewebewiderstandsfähigkeit beiträgt. Zytokeratin 15 ist an der Assemblierung von Intermediärfilamenten beteiligt und steht in Wechselwirkung mit desmosomalen und hemidesmosomalen Adhäsionskomplexen, wodurch Zell-Zell-Adhäsion, Polarität und Migrationsprogramme beeinflusst werden. In Haut und mehrschichtigen Epithelien wird die KRT15-Expression häufig genutzt, um Stammzelldynamik, epidermale Differenzierung und Wundheilungsprozesse zu untersuchen. Fehlregulierte Keratinnetzwerke, einschließlich veränderter KRT15-Expressionsmuster, werden mit epithelialen Stressantworten in Verbindung gebracht und in Kontexten von Hyperproliferation, Entzündung und Tumorbiologie untersucht.
Cytokeratin 15 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KRT15-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KRT15 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KRT15-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KRT15-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.