Cytokeratin 15 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401869-ACT

KRT15 kodiert Zytokeratin 15, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ I, das in basalen Epithelkompartimenten angereichert ist und häufig als Marker für keratinozytäre Vorläufer- und stammzellähnliche Zustände verwendet wird. Zytokeratin 15 trägt über die Assemblierung von Keratinfilamenten und das Zusammenspiel mit Differenzierungs- und Wundheilungsprogrammen zur Integrität des Zytoskeletts, zur Dynamik der Zell-Zell-Adhäsion und zu epithelialen Stressantworten bei. Seine Expression steht mit epithelialer Homöostase und Umbauprozessen in Verbindung; berichtet wurden Zusammenhänge mit veränderten Differenzierungszuständen in der Haut und anderen mehrschichtigen Epithelien. Dysregulierte KRT15-Expressionsmuster wurden im Kontext epithelialer Hyperproliferation, tumorzellulärer Plastizität und der Haarfollikelbiologie untersucht, was seine Eignung für mechanistische Studien zur Linienfestlegung und Geweberegeneration unterstreicht.

Cytokeratin 15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KRT15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cytokeratin 15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KRT15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KRT15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cytokeratin 15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KRT15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cytokeratin 15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cytokeratin 15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KRT15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.