Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 15: sc-401869-ACT

KRT15 codifica la citoqueratina 15, una proteína de filamento intermedio de tipo I enriquecida en compartimentos epiteliales basales y utilizada con frecuencia como marcador de estados progenitores y similares a células madre de los queratinocitos. La citoqueratina 15 contribuye a la integridad del citoesqueleto, a la dinámica de la adhesión célula–célula y a las respuestas epiteliales al estrés mediante el ensamblaje de filamentos de queratina y la comunicación cruzada con programas de diferenciación y reparación de heridas. Su expresión se asocia con la homeostasis y la remodelación epitelial, con vínculos descritos a estados de diferenciación alterados en la piel y otros epitelios estratificados. Los patrones desregulados de KRT15 se han estudiado en contextos de hiperproliferación epitelial, plasticidad de células tumorales y biología del folículo piloso, lo que respalda su utilidad en estudios mecanísticos del compromiso de linaje y la regeneración tisular.

Cytokeratin 15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRT15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cytokeratin 15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRT15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRT15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cytokeratin 15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRT15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cytokeratin 15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cytokeratin 15 en células tumorales con expresión de KRT15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.