Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 1: sc-400893-NIC

KRT1 codifica la citoqueratina 1, una proteína de filamentos intermedios de tipo II que forma heterodímeros con la queratina 10 para constituir la red de queratinas suprabasales en epitelios estratificados. Este armazón del citoesqueleto aporta resiliencia mecánica, favorece la adhesión célula–célula y coordina la diferenciación de los queratinocitos mediante la remodelación dinámica de los filamentos intermedios. La función de la citoqueratina 1 se relaciona con los programas epiteliales de respuesta al estrés y con el recambio de filamentos dependiente de la fosforilación de queratinas, que influyen en la formación de la barrera y la integridad tisular. La alteración de la expresión de KRT1 o sus mutaciones se asocian con trastornos hereditarios de la queratinización y contribuyen a fenotipos de fragilidad epitelial, lo que la convierte en un marcador útil y un nodo funcional en la biología de la piel y el modelado de enfermedades.

Cytokeratin 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.