Cytokeratin 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400893-ACT

KRT1 kodiert für Zytokeratin 1, ein Typ‑II-Intermediärfilamentprotein, das mit Keratin 10 ein Heterodimer bildet und so das suprabasale Keratinnetzwerk in mehrschichtigen Epithelien aufbaut. Dieses Filamentsystem verleiht mechanische Stabilität, unterstützt die desmosomenvermittelte Zell‑Zell-Adhäsion und ist an Programmen der Keratinozytendifferenzierung sowie der Barrierebildung beteiligt. Die Dynamik von Zytokeratin 1 ist mit der Umgestaltung des Zytoskeletts und stressantwortlicher Signalgebung verknüpft, die die epitheliale Integrität während Wundheilung und Entzündung beeinflussen. Eine fehlregulierte KRT1-Expression oder eine gestörte Organisation der Keratinfilamente steht mit Phänotypen epidermaler Fragilität in Zusammenhang und wird häufig in Studien zu Hyperkeratose, Verhornungsdefekten und epithelialer Stressadaptation untersucht.

Cytokeratin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KRT1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cytokeratin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KRT1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KRT1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cytokeratin 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KRT1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cytokeratin 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cytokeratin 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KRT1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.