Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 1: sc-400893-ACT

KRT1 codifica la citoqueratina 1, una proteína de filamento intermedio de tipo II que forma un heterodímero con la queratina 10 para constituir la red de queratinas suprabasales en epitelios estratificados. Este sistema de filamentos aporta resistencia mecánica, sostiene la adhesión célula–célula asociada a desmosomas y participa en los programas de diferenciación de queratinocitos y de formación de la barrera. La dinámica de la citoqueratina 1 se integra con la remodelación del citoesqueleto y con la señalización de respuesta al estrés, que influyen en la integridad epitelial durante la reparación de heridas y la inflamación. La expresión desregulada de KRT1 o la organización anómala de los filamentos de queratina se asocian a fenotipos de fragilidad epidérmica y se estudian con frecuencia en investigaciones sobre hiperqueratosis, defectos de queratinización y adaptación del epitelio al estrés.

Cytokeratin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cytokeratin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cytokeratin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cytokeratin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cytokeratin 1 en células tumorales con expresión de KRT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.