Plásmido Doble Nickase (h) cytochrome c1: sc-404958-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)cytochrome c1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa cytochrome c1 (h) y el plásmido de doble nickasa cytochrome c1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CYC1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cytochrome c1 Anticuerpo (A-5): sc-514435
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) cytochrome c1 | sc-404958-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) cytochrome c1 | sc-404958-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano CYC1 codifica el citocromo c1, una subunidad esencial del complejo III mitocondrial (complejo citocromo bc1) que transfiere electrones desde el ubiquinol al citocromo c en la membrana interna mitocondrial. Esta actividad sostiene la fosforilación oxidativa al contribuir a la translocación de protones, lo que ayuda a establecer el gradiente electroquímico utilizado para la síntesis de ATP. La alteración de los componentes del complejo III puede modificar el equilibrio redox mitocondrial y la producción de especies reactivas de oxígeno, vinculando la biología de CYC1 con vías que regulan el metabolismo energético celular y las respuestas al estrés. La respiración mitocondrial desregulada y la integridad de la cadena de transporte de electrones se estudian con frecuencia en el contexto de la remodelación metabólica y la disfunción mitocondrial asociada a la neurodegeneración.
cytochrome c1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYC1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.