Plasmide CRISPR d'Activation (h) cytochrome c1: sc-404958-ACT

Le gène humain **CYC1** code le **cytochrome c1**, une sous-unité centrale du **complexe III** de la chaîne respiratoire mitochondriale (ubiquinol–cytochrome c réductase), qui assure le transfert d’électrons de l’ubiquinol vers le cytochrome c et contribue à la translocation de protons à travers la membrane interne mitochondriale. Par son rôle dans la phosphorylation oxydative, le cytochrome c1 participe à la production d’ATP, au maintien du potentiel de membrane mitochondrial et à l’homéostasie rédox, avec des effets en aval sur la signalisation par les espèces réactives de l’oxygène et l’adaptation métabolique. Des altérations de la fonction du complexe III et un déséquilibre bioénergétique mitochondrial sont fréquemment associés à des phénotypes neuromusculaires et métaboliques, et ont été observés dans des contextes de métabolisme tumoral et d’autres troubles caractérisés par une dysfonction mitochondriale. L’expression de **CYC1** et l’intégrité du complexe III sont donc largement étudiées comme indicateurs de la régulation de la chaîne de transport d’électrons, des réponses au stress mitochondrial et du remodelage bioénergétique.

cytochrome c1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cytochrome c1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cytochrome c1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cytochrome c1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cytochrome c1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.