Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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cytochrome c Double Nickase Plasmid (m): sc-419891-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das cytochrome c Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- cytochrome c Double-Nickase-Plasmid (m) und cytochrome c Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cycs abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: cytochrome c: sc-13156
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
cytochrome c Double Nickase Plasmid (m) | sc-419891-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cytochrome c Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419891-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse **Cycs** kodiert Cytochrom c, ein hochkonserviertes Hämprotein, das Elektronen zwischen den Komplexen III und IV der mitochondrialen Atmungskette überträgt und so die oxidative Phosphorylierung und die ATP-Produktion unterstützt. Über seine bioenergetische Funktion hinaus ist Cytochrom c an der intrinsischen Apoptose beteiligt, indem es nach der Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran die Bildung des Apoptosoms und die Aktivierung von Caspasen fördert. Die Funktion von **Cycs** ist eng mit der mitochondrialen Homöostase, dem Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und metabolischen Stressantworten verknüpft, die Entscheidungen über das Zellüberleben mitbestimmen. Eine Fehlregulation der Cytochrom-c-Signalgebung wird in Studien zu Neurodegeneration, Ischämie‑Reperfusionsschädigung, Aktivierung von Immunzellen und dem Stoffwechsel von Krebszellen häufig als molekularer Readout verwendet.
cytochrome c Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cycs-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cycs abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cycs-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cycs-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.