Cystinosin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429900

Descripción general

Ctns codifica la cistinosina, un transportador lisosomal de cistina impulsado por el gradiente de H+ que media el eflujo de cistina desde el lumen lisosomal hacia el citosol, conectando el transporte lisosomal con el equilibrio redox celular y la homeostasis de aminoácidos. La pérdida de la actividad de la cistinosina altera la función lisosomal, favorece la acumulación de cistina y modifica vías implicadas en la dinámica autofagia–lisosoma, las respuestas al estrés oxidativo y la adaptación metabólica. En sistemas murinos, la disrupción de Ctns se utiliza ampliamente para modelar los mecanismos subyacentes a los fenotipos de almacenamiento de cistina y para examinar cómo los defectos del transporte lisosomal remodelan la señalización celular de estrés. Estos procesos son relevantes para comprender cómo las redes de tráfico y degradación centradas en el lisosoma influyen en la homeostasis tisular en tipos celulares relevantes para riñón, ojo y sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cystinosin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ctns en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ctns junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ctns tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cystinosin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ctns para la investigación de la señalización de Cystinosin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ctns críticos para la función de Cystinosin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ctns para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cystinosin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Cystinosin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ctns. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cystinosin (m) y el plásmido HDR Cystinosin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ctns para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ctns definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.