Plasmide Double Nickase (h) cystatin D: sc-405049-NIC

CST5 code la cystatine D, une cystatine de type 2 sécrétée qui inhibe des protéases à cystéine lysosomales et extracellulaires telles que les cathepsines, contribuant ainsi à la régulation de la protéolyse, du traitement des antigènes et de l’homéostasie de la barrière épithéliale. En modulant l’activité des cathepsines, la cystatine D peut influencer le renouvellement de la matrice extracellulaire et des voies de signalisation dépendantes des protéases, pertinentes pour le remodelage tissulaire et les réponses inflammatoires. Une expression altérée de CST5 ou un déséquilibre protéase–inhibiteur a été associé à des modifications du comportement du microenvironnement tumoral, à une protéolyse liée à l’invasion et à la physiopathologie des muqueuses, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de la protéostasie et de la biologie épithéliale. CST5 constitue donc une cible utile pour analyser comment le contrôle des cathepsines façonne la différenciation cellulaire, les réponses au stress et la communication intercellulaire dans des systèmes modèles humains.

cystatin D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CST5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CST5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CST5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CST5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.