CYP8B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403383
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- CYP8B1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im CYP8B1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYP8B1: sc-101387
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP8B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-403383 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CYP8B1 kodiert ein im endoplasmatischen Retikulum lokalisiertes Cytochrom-P450-Enzym, das die 12α‑Hydroxylierung von Zwischenprodukten der Gallensäuresynthese katalysiert – ein zentraler Faktor für die Bildung von Cholsäure und für das Verhältnis von Cholsäure zu Chenodesoxycholsäure. Durch die Steuerung der Gallensäurezusammensetzung beeinflusst CYP8B1 die enterohepatische Signalübertragung über FXR und TGR5 und prägt dadurch den hepatischen Lipid- und Glukosestoffwechsel sowie die übergeordnete Sterolhomöostase. Eine veränderte CYP8B1‑Aktivität steht in Zusammenhang mit dysregulierten Gallensäurepools, wie sie bei metabolischen Lebererkrankungen, cholestatischen Zuständen und Erkrankungen mit gestörter Cholesterinverarbeitung beobachtet werden. Damit ist CYP8B1 ein nützlicher Ansatzpunkt, um gallensäuregetriebene Transkriptionsprogramme und das Zusammenspiel zwischen Hepatozyten und intestinaler Signalgebung zu untersuchen.
Das CYP8B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CYP8B1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CYP8B1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CYP8B1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CYP8B1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CYP8B1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CYP8B1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CYP8B1-Exone abzielen, die für die CYP8B1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CYP8B1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom CYP8B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CYP8B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CYP8B1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CYP8B1 HDR-Plasmid (h) und CYP8B1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CYP8B1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CYP8B1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.