Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP8B1 (h): sc-403383

Présentation

CYP8B1 code une enzyme du cytochrome P450 localisée dans le réticulum endoplasmique, qui catalyse la 12α‑hydroxylation d’intermédiaires des acides biliaires, un déterminant clé de la production d’acide cholique et du ratio acide cholique/acide chénodésoxycholique. En contrôlant la composition des acides biliaires, CYP8B1 influence la signalisation entérohépatique via FXR et TGR5, modulant le métabolisme hépatique des lipides et du glucose ainsi qu’une homéostasie plus large des stérols. Une activité altérée de CYP8B1 est associée à des pools d’acides biliaires dérégulés observés dans les maladies hépatiques métaboliques, les états cholestatiques et les affections touchant la gestion du cholestérol. Cela fait de CYP8B1 un nœud utile pour disséquer les programmes transcriptionnels pilotés par les acides biliaires et les interactions entre les hépatocytes et la signalisation intestinale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP8B1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYP8B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYP8B1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYP8B1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP8B1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYP8B1 pour l'étude de la signalisation de CYP8B1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYP8B1 essentiels à la fonction de CYP8B1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYP8B1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP8B1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CYP8B1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYP8B1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP8B1 plasmide HDR (h) et le CYP8B1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYP8B1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYP8B1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.