CYP7B1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-405345-LAC

CYP7B1 kodiert ein mikrosomales Cytochrom-P450-Enzym, das die 7α‑Hydroxylierung von Sterolen katalysiert, zur Cholesterin-Katabolisierung und zur Biosynthese von Gallensäuren beiträgt und den Stoffwechsel von Oxysterolen und Neurosteroiden moduliert. Durch die Beeinflussung der Spiegel von Zwischenprodukten wie 27‑Hydroxycholesterin wirkt CYP7B1 auf die Lipidsignalgebung und auf durch nukleäre Rezeptoren regulierte Transkriptionsprogramme. Eine veränderte CYP7B1‑Aktivität wurde mit einer gestörten Sterolhomöostase und mit für die Neurobiologie relevanten Signalwegen in Verbindung gebracht, und genetische Variation ist mit erblichen neurodegenerativen sowie neuromuskulären Phänotypen assoziiert. Diese Eigenschaften machen CYP7B1 zu einem geeigneten Knotenpunkt, um den metabolischen Crosstalk zwischen Sterolfluss, endokriner Signalgebung und gewebespezifischer Genregulation zu untersuchen.

CYP7B1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CYP7B1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CYP7B1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CYP7B1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CYP7B1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CYP7B1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.