CYP7B1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405345-ACT

Il gene umano **CYP7B1** codifica il citocromo P450 7B1, una monoossigenasi microsomiale che catalizza la **7α-idrossilazione** degli ossisteroli e degli intermedi steroidei, sostenendo la sintesi degli acidi biliari e il metabolismo degli ormoni steroidei. Modulando i livelli di ossisteroli attivi nella segnalazione, **CYP7B1** influenza l’omeostasi lipidica e i programmi trascrizionali legati ai recettori nucleari nei tessuti epatici ed extraepatici. La deregolazione dell’attività di **CYP7B1** è associata a errori congeniti del metabolismo degli steroli/acidi biliari ed è stata collegata a fenotipi neurologici ed epatici tramite un’alterata eliminazione degli ossisteroli e lo squilibrio delle vie a valle. Di conseguenza, **CYP7B1** è ampiamente studiato in contesti quali il turnover del colesterolo, la segnalazione dei neurosteroidi e le risposte allo stress metabolico.

CYP7B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYP7B1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP7B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYP7B1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYP7B1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP7B1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYP7B1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP7B1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP7B1 nelle cellule tumorali con espressione di CYP7B1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.