Plásmido CRISPR de Activación (h2) CYP4X1: sc-415272-ACT-2

El CYP4X1 humano codifica una monooxigenasa del citocromo P450 de la familia CYP4 que cataliza el metabolismo oxidativo de lípidos endógenos, contribuyendo a la hidroxilación de ácidos grasos y a procesos de señalización relacionados derivados de eicosanoides. La actividad de CYP4X1 se asocia con la homeostasis de los lípidos de membrana y la regulación de las respuestas celulares dependiente del estado redox, situándola en vías que coordinan el recambio de mediadores lipídicos y la especialización metabólica específica de cada tejido. La expresión desregulada o la oxidación lipídica alterada asociada a CYP4X1 se ha investigado en el contexto de la neurobiología y la oncología, donde cambios en metabolitos relacionados con el ácido araquidónico pueden influir en la señalización asociada a la inflamación y en programas de proliferación celular. La edición génica de CYP4X1 permite estudios mecanísticos del metabolismo lipídico impulsado por P450, el mapeo de sustratos y la metabolómica, y la validación de los efectos de las vías en modelos celulares modificados relevantes para la biología de enfermedades humanas.

CYP4X1 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP4X1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP4X1 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP4X1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP4X1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP4X1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP4X1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP4X1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP4X1 en células tumorales con expresión de CYP4X1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.