CYP3A4 Double Nickase Plasmid (h): sc-416463-NIC

CYP3A4 kodiert eine häm-thiolatgebundene Cytochrom-P450-Monooxygenase, die den oxidativen Metabolismus einer breiten Palette von Xenobiotika und endogenen Substraten katalysiert, darunter Steroide, Gallensäuren und Fettsäuren. Das Enzym ist vor allem im endoplasmatischen Retikulum aktiv und ist in hepatische und intestinale Netzwerke des Arzneistoffmetabolismus eingebunden, indem es die Biotransformation der Phase I mit nachgeschalteten Entgiftungs- und Transportwegen koordiniert. Die Aktivität von CYP3A4 wird durch nukleäre Rezeptor-Signalwege reguliert, einschließlich PXR und CAR, wodurch expositionsabhängige Transkriptionsprogramme mit der metabolischen Kapazität verknüpft werden. Interindividuelle Unterschiede in der Expression oder Funktion von CYP3A4 sind ein wesentlicher Determinant von Arzneimittel–Arzneimittel-Interaktionen und veränderten metabolischen Phänotypen, wie sie in Kontexten von Lebererkrankungen, Entzündung und krebsassoziierter metabolischer Umprogrammierung untersucht werden.

CYP3A4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP3A4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP3A4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP3A4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP3A4-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.