Plásmido CRISPR de Activación (h) CYP2A7: sc-403449-ACT

El CYP2A7 humano codifica una monooxigenasa del citocromo P450 que participa en el metabolismo oxidativo de sustratos endógenos y de diversos xenobióticos dentro de las redes microsomales de metabolismo de fármacos. Como miembro de la familia CYP2, el CYP2A7 está vinculado al ciclo redox con la NADPH–citocromo P450 reductasa y respalda procesos de biotransformación de fase I que influyen en las vías posteriores de conjugación y eliminación. La variación en la actividad del locus CYP2A puede modular la capacidad metabólica y el potencial de bioactivación, lo que lo hace relevante para estudios de sensibilidad química, respuesta a tóxicos y diferencias interindividuales en el metabolismo. Por ello, la expresión de CYP2A7 se examina comúnmente en el hígado y en otros tejidos metabólicamente activos para contextualizar la regulación de las vías en condiciones fisiológicas y de estrés.

CYP2A7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP2A7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP2A7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP2A7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP2A7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP2A7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP2A7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP2A7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP2A7 en células tumorales con expresión de CYP2A7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.