CYP2A13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403450

Übersicht

CYP2A13 kodiert eine humane Cytochrom-P450-Monooxygenase, die überwiegend am oxidativen Metabolismus von Xenobiotika und endogenen Substraten beteiligt ist. Als Teil des Phase-I-Enzymnetzwerks des Arzneistoffmetabolismus trägt CYP2A13 zum NADPH-abhängigen Elektronentransfer zusammen mit der Cytochrom-P450-Reduktase bei und katalysiert Reaktionen, die das zelluläre Redoxgleichgewicht und die Bildung reaktiver Metaboliten beeinflussen. Das Gen wird in Geweben der Atemwege stark exprimiert und ist an der Bioaktivierung und Entgiftung inhalierter Verbindungen beteiligt, wodurch seine Aktivität mit Signalwegen verknüpft ist, die für Stressantworten des pulmonalen Epithels relevant sind. Unterschiede in der Expression oder Aktivität von CYP2A13 wurden mit interindividuellen Unterschieden in der Verarbeitung von Xenobiotika und der Anfälligkeit für chemisch induzierte Gewebeschäden in Verbindung gebracht, was seine Bedeutung für Modelle in der Toxikologie- und Karzinogeneseforschung unterstreicht.

Das CYP2A13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CYP2A13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CYP2A13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CYP2A13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CYP2A13-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CYP2A13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CYP2A13-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CYP2A13-Exone abzielen, die für die CYP2A13-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CYP2A13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CYP2A13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CYP2A13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CYP2A13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CYP2A13 HDR-Plasmid (h) und CYP2A13 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CYP2A13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CYP2A13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.