Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP26B1: sc-403610-ACT

CYP26B1 code une enzyme du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif de l’acide rétinoïque tout-trans (RA), façonnant ainsi des gradients intracellulaires de RA et contrôlant l’intensité ainsi que la durée de la signalisation des rétinoïdes. En régulant la disponibilité du RA, CYP26B1 influence les programmes transcriptionnels en aval de RAR/RXR qui gouvernent la mise en place des patrons embryonnaires, le développement du squelette et des membres, la différenciation épithéliale et la maturation des cellules immunitaires. Une activité altérée de CYP26B1 peut perturber l’homéostasie du RA et a été associée à des troubles du développement impliquant des phénotypes craniofaciaux et squelettiques, avec une pertinence supplémentaire dans des contextes où la différenciation induite par le RA et la signalisation inflammatoire sont dérégulées. En tant que nœud clé du catabolisme des rétinoïdes, CYP26B1 est fréquemment étudié dans des voies reliant le métabolisme des xénobiotiques, la signalisation des morphogènes et la spécification des lignages.

CYP26B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP26B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP26B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP26B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP26B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP26B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP26B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP26B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP26B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP26B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.