Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP1B1: sc-400907-ACT

CYP1B1 code une monooxygénase du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif de substrats endogènes, notamment les œstrogènes, les rétinoïdes et des dérivés de l’acide arachidonique, ainsi que de nombreux xénobiotiques. Dans le cadre du métabolisme de phase I, l’activité de CYP1B1 recoupe les programmes de détoxification régulés par l’AHR et influence l’équilibre rédox cellulaire via la génération d’intermédiaires réactifs. Une expression ou une fonction altérée de CYP1B1 a été associée à une dérégulation de la signalisation stéroïdienne, des réponses au stress oxydant et une susceptibilité tissulaire spécifique à l’exposition aux substances toxiques. Le CYP1B1 humain est fréquemment étudié dans le contexte de la bioactivation de cancérogènes, de la biologie hormonodépendante et des troubles du développement oculaire liés à des variants héréditaires.

CYP1B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP1B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP1B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP1B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP1B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP1B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP1B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP1B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP1B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP1B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.