CYP17A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401918-ACT

CYP17A1 codifica o citocromo P450 17A1, uma monooxigenase microsomal que catalisa tanto as reações de 17α-hidroxilase quanto de 17,20-liase em tecidos esteroidogénicos, direcionando o fluxo através da biossíntese de glicocorticoides e de esteroides sexuais. Como um nó-chave na via dos hormonas esteroides, o CYP17A1 influencia a produção a jusante de androgénios e estrogénios e contribui para a regulação endócrina por meio de atividade coordenada com outras enzimas P450 e parceiros redox no retículo endoplasmático. A expressão alterada de CYP17A1 ou a sua função enzimática tem sido associada a desequilíbrios esteroidogénicos e a fenótipos endócrinos, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos do metabolismo hormonal e de programas de transcrição dependentes de sinalização. A modulação experimental de CYP17A1 dá suporte a investigações sobre estados celulares impulsionados por esteroides, reprogramação metabólica e crosstalk entre vias relevante para a biologia endócrina.

CYP17A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP17A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP17A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP17A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP17A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP17A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP17A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP17A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP17A1 em células tumorais com expressão de CYP17A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.