Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP11B2 (m): sc-419894

Présentation

Cyp11b2 code pour CYP11B2 (aldostérone synthase), une enzyme mitochondriale du cytochrome P450 qui catalyse les étapes terminales de la biosynthèse de l’aldostérone à partir de la désoxycorticostérone. Cette activité s’inscrit dans la voie de la stéroïdogenèse, en couplant le transfert d’électrons depuis l’adrénodoxine/la réductase de l’adrénodoxine à des réactions oxydatives qui régulent la production de minéralocorticoïdes ainsi que, en aval, l’homéostasie des électrolytes et des fluides. Dans les cellules de la zone glomérulée surrénalienne de la souris, CYP11B2 intègre des signaux hormonaux, notamment des programmes dépendants du calcium et répondant à l’angiotensine II, afin d’ajuster la production de stéroïdes. Une expression dérégulée de Cyp11b2 ou un excès d’aldostérone sont associés à une physiologie cardiovasculaire et rénale inadaptée, ce qui fait de ce gène une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle endocrinien et du remodelage métabolique en réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP11B2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cyp11b2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cyp11b2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cyp11b2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP11B2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cyp11b2 pour l'étude de la signalisation de CYP11B2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cyp11b2 essentiels à la fonction de CYP11B2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cyp11b2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP11B2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CYP11B2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cyp11b2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP11B2 plasmide HDR (m) et le CYP11B2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cyp11b2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cyp11b2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.