cyclin G2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403620-ACT

CCNG2 kodiert Cyclin G2, ein atypisches Cyclin, das überwiegend als negativer Regulator des Zellzyklusfortschritts und der Zellproliferation wirkt. Cyclin G2 wird durch wachstumshemmende und stressbedingte Signale induziert und trägt zur Checkpoint-Kontrolle bei, indem es die Aktivität cyclinabhängiger Kinasen moduliert und Signale aus Signalwegen wie p53-abhängigen Antworten sowie phosphataseassoziierten regulatorischen Netzwerken integriert. Aufgrund seiner Effekte auf den G1/S-Übergang, die Differenzierung und die Empfindlichkeit gegenüber Apoptose wird die CCNG2-Expression häufig im Zusammenhang mit der veränderten Zellzykluskontrolle untersucht, wie sie bei Krebs und anderen proliferativen Erkrankungen beobachtet wird. Eine fehlregulierte CCNG2-Expression wurde in Tumormodellen zudem mit Veränderungen der Invasion, metastaseassoziierten Phänotypen und Signalwegen der Therapieantwort in Verbindung gebracht, was das Gen für mechanistische Studien zur Wachstumsbegrenzung relevant macht.

cyclin G2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CCNG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

cyclin G2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CCNG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CCNG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen cyclin G2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CCNG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von cyclin G2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des cyclin G2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CCNG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.