cyclin C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402308

Übersicht

CCNC kodiert für Cyclin C, ein konserviertes Cyclin, das vor allem mit CDK8 und verwandten Kinasen innerhalb des Mediator-Komplexes zusammenwirkt, um die RNA-Polymerase-II-abhängige Transkription zu modulieren. Über die Mediator-Kinase-Signalgebung trägt Cyclin C dazu bei, Signale aus MAPK-, Wnt/β-Catenin- und anderen stressresponsiven Signalwegen zu integrieren, um Zellzykluskontrolle, Differenzierungsprogramme und adaptive transkriptionelle Antworten zu koordinieren. Cyclin C wurde zudem mit der mitochondrialen Dynamik und der Signalgebung bei oxidativem Stress in Verbindung gebracht, was seine Rolle an der Schnittstelle zwischen nukleärer Transkription und zellulärer Homöostase widerspiegelt. Eine Fehlregulation der durch CCNC vermittelten transkriptionellen Kontrolle wurde mit veränderter Proliferation und Genexpressionsprogrammen in Zusammenhang gebracht, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit aberranter Signalgebung und Stressantworten beobachtet werden.

Das cyclin C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CCNC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CCNC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CCNC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die cyclin C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CCNC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der cyclin C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CCNC-Exone abzielen, die für die cyclin C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CCNC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom cyclin C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom cyclin C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CCNC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das cyclin C HDR-Plasmid (h) und cyclin C HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CCNC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CCNC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.