cyclin C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402308-ACT

Das humane Gen **CCNC** kodiert **Cyclin C**, ein Transkriptions-Cyclin, das innerhalb des Mediator-Kinase-Moduls mit **CDK8** oder **CDK19** zusammenwirkt, um die RNA-Polymerase-II-abhängige Transkription fein abzustimmen. Über die Regulation stimuli-responsiver Genprogramme beeinflusst Cyclin C den Zellzyklus, die metabolische Anpassung und die Stresssignalgebung, einschließlich Signalwege, die die mitochondriale Dynamik und die Apoptose steuern. Die CCNC-Aktivität überschneidet sich mit den Transkriptionsnetzwerken von **WNT/β-Catenin**, **TGF-β** und **NF-κB** und verknüpft damit die Mediator-Kinase-Signalgebung mit Entwicklungs- und Entzündungsprozessen. Eine fehlregulierte CCNC/CDK8-Mediator-Funktion wurde mit veränderten Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit gestörter Kontrolle der Genexpression beobachtet werden.

cyclin C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CCNC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

cyclin C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CCNC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CCNC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen cyclin C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CCNC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von cyclin C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des cyclin C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CCNC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.