CX3CR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419886
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- CX3CR1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im CX3CR1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CX3CR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419886 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Cx3cr1 kodiert CX3CR1, einen Chemokinrezeptor mit sieben Transmembrandomänen für CX3CL1 (Fraktalkin), der Leukozytenadhäsion, Chemotaxis und Gewebeüberwachung reguliert. In der Maus wird CX3CR1 vor allem von Monozyten/Makrophagen, dendritischen Zellen und Mikroglia exprimiert und verknüpft die Chemokin-GPCR-Signalübertragung mit Zytoskelett-Remodelling, Integrinaktivierung und entzündlichen Transkriptionsprogrammen. CX3CR1-abhängige Signalwege prägen die Homöostase der Mikroglia und die neuroimmunologische Kommunikation und sind zudem an vaskulärer Entzündung sowie am Myeloid-Zelltransport in peripheren Geweben beteiligt. Entsprechend wird Cx3cr1 in Modellen für Neuroinflammation, Atherosklerose und chronische entzündliche Erkrankungen häufig als Marker und funktioneller Knotenpunkt eingesetzt.
Das CX3CR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cx3cr1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cx3cr1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cx3cr1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CX3CR1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cx3cr1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CX3CR1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Cx3cr1-Exone abzielen, die für die CX3CR1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cx3cr1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom CX3CR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CX3CR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cx3cr1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CX3CR1 HDR-Plasmid (m) und CX3CR1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cx3cr1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cx3cr1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.