Plasmide Double Nickase (h) CUL-3: sc-416925-NIC

CUL3 code la culline‑3 (CUL‑3), une protéine échafaudage centrale des complexes ubiquitine‑ligase E3 CRL3, qui recrutent des adaptateurs de substrats à domaine BTB afin d’orienter la dégradation protéasomale dépendante de l’ubiquitine. En assurant la dégradation régulée de protéines de signalisation et de réponse au stress, CUL‑3 contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire, des voies du stress oxydant (dont KEAP1–NRF2), de la dynamique du cytosquelette et de la signalisation de l’immunité innée. Une activité altérée de CUL3 peut reconfigurer l’homéostasie protéique et les programmes transcriptionnels, influençant des voies liées à la signalisation oncogénique, au neurodéveloppement et à l’adaptation au stress cellulaire. En génétique humaine, des variants de CUL3 et la dérégulation de CRL3 sont associés à des mécanismes liés à l’hypertension ainsi qu’à des changements plus larges, pertinents pour diverses maladies, dans la signalisation de l’ubiquitine.

CUL-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CUL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CUL3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CUL3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CUL3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.