CUL-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416925

Übersicht

CUL3 kodiert Cullin-3 (CUL-3), ein zentrales Gerüstprotein der CUL3–RBX1-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexe, die BTB-Domänen-Adapterproteine rekrutieren und dadurch Substratspezifität für Ubiquitinierung und proteasomalen Abbau verleihen. Über den regulierten Abbau von Zielproteinen, die an der Redox-Homöostase, der Zellzykluskontrolle, der Zytoskelettdynamik und der Stresssignalübertragung beteiligt sind, trägt CUL-3 zur Koordination von Signalwegen wie der Ubiquitin-Proteasom-Funktion und den NRF2/KEAP1-vermittelten oxidativen Stressantworten bei. Eine Störung der CUL3-abhängigen Ubiquitinierung kann die Proteostase sowie Signalnetzwerke beeinträchtigen, die Entzündung, Stoffwechsel und Genomintegrität prägen. Eine dysregulierte CUL3-Aktivität und veränderte Adapter-Interaktionen wurden in der Literatur mit krebsassoziierten Signalwegen sowie Mechanismen kardiovaskulärer und neuroentwicklungsbezogener Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seine Eignung als Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen unterstreicht.

Das CUL-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CUL3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CUL3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CUL3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CUL-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CUL3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CUL-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CUL3-Exone abzielen, die für die CUL-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CUL3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CUL-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CUL-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CUL3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CUL-3 HDR-Plasmid (h) und CUL-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CUL3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CUL3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.