Plasmide CRISPR d'Activation (m) CUL-3: sc-424091-ACT

Cul3 chez la souris code CUL‑3, une protéine d’échafaudage centrale des complexes E3 ubiquitine‑ligase de type Cullin‑RING, qui coordonnent l’ubiquitination des substrats et leur dégradation dépendante du protéasome. Via des protéines adaptatrices à domaine BTB, CUL‑3 régule le contrôle qualité des protéines, la progression du cycle cellulaire, la dynamique du cytosquelette et la signalisation du stress oxydant, notamment des voies liées à la régulation KEAP1–NRF2 et à la transcription induite par le stress. L’ubiquitination dépendante de Cul3 influence le développement et l’homéostasie tissulaire en modulant l’amplitude des signaux et la stabilité du protéome. Une activité de CUL‑3 dérégulée a été associée à des perturbations de la protéostasie, à un déséquilibre rédox et à des réseaux de signalisation pertinents pour la transformation oncogénique et la neurobiologie, ce qui motive son étude dans des modèles liés aux maladies.

CUL-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cul3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CUL-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cul3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cul3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CUL-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cul3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CUL-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CUL-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cul3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.