Plasmide CRISPR/Cas9 KO CUG-BP2 (h): sc-403267

Présentation

CELF2 (CUG-BP2) est une protéine de liaison à l’ARN de la famille CELF qui coordonne la régulation post‑transcriptionnelle des gènes en contrôlant l’épissage alternatif, la stabilité des ARNm et la traduction sur un large éventail de transcrits. Elle participe au couplage entre le traitement de l’ARN et les signaux reçus lors de la différenciation cellulaire et des réponses au stress, influençant des réseaux impliqués dans l’organisation du cytosquelette, le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose. Les programmes d’ARN dépendants de CELF2 contribuent à la sélection, spécifique des tissus, d’isoformes de transcrits et sont fréquemment étudiés dans le contexte de l’activation des cellules immunitaires et de la régulation génique du développement. Une activité de CELF2 dérégulée a été associée à des modifications des paysages d’épissage observées dans des modèles neuromusculaires et liés au cancer, ce qui motive des études mécanistiques de ses cibles ARN et de ses partenaires régulateurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CUG-BP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CELF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CELF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CELF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CUG-BP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CELF2 pour l'étude de la signalisation de CUG-BP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CELF2 essentiels à la fonction de CUG-BP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CELF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CUG-BP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CUG-BP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CELF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CUG-BP2 plasmide HDR (h) et le CUG-BP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CELF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CELF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.