CTRL Double Nickase Plasmid (h): sc-410749-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CTRL Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CTRL Double-Nickase-Plasmid (h) und CTRL Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CTRL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CTRL Double Nickase Plasmid (h) | sc-410749-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CTRL Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410749-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane CTRL-Gen kodiert die chymotrypsinähnliche Protease CTRL, eine Serin-Endopeptidase, die zur proteolytischen Verarbeitung von Proteinen und Peptiden in verdauungsbezogenen und extrazellulären Umgebungen beiträgt. Als Protease der Trypsin-Familie ist die CTRL-Aktivität in Protease-Aktivierungskaskaden und eine regulierte Proteolyse eingebunden, die die Reifung von Peptidhormonen, die Nährstoffverwertung und lokale Signalprozesse beeinflussen kann. Eine dysregulierte Aktivität von Serinproteasen wird allgemein mit Entzündungsreaktionen und Gewebeumbau in Verbindung gebracht, wodurch CTRL ein nützliches Modell für die Untersuchung des Gleichgewichts in Proteasenetzwerken und der Protease–Substrat-Spezifität ist. Die experimentelle Modulation von CTRL unterstützt mechanistische Arbeiten zur Regulation proteasevermittelter Signalwege und zu nachgelagerten Effekten auf zellulären Stress und inflammatorische Signalgebung.
CTRL Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTRL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTRL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTRL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTRL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.