CTRL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410749

Übersicht

CTRL (chymotrypsin-like) kodiert eine Serinprotease, die an der proteolytischen Verarbeitung von Nahrungsproteinen beteiligt ist und zum umfassenderen Netzwerk verdauungsrelevanter Enzyme beiträgt. Als Mitglied der Trypsin-ähnlichen Peptidasefamilie ist die CTRL-Aktivität der extrazellulären Proteolyse zuzuordnen und lässt sich in Signalwegen betrachten, die die Proteaseaktivierung, den Substratumsatz und die Regulation durch endogene Proteaseinhibitoren steuern. Unterschiede in der Expression oder Aktivität von Verdauungsproteasen werden in Studien zur Pankreas- und Gastrointestinalbiologie häufig untersucht, einschließlich Mechanismen, die die Enzymsekretion, die Zymogenaktivierung und die Proteostase der Schleimhaut beeinflussen. In diesen Kontexten ist CTRL ein nützlicher molekularer Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie proteaseabhängige Mikroumgebungen die zelluläre Signalübertragung und die Gewebephysiologie beeinflussen.

Das CTRL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CTRL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CTRL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CTRL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CTRL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CTRL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CTRL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CTRL-Exone abzielen, die für die CTRL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CTRL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CTRL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CTRL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CTRL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CTRL HDR-Plasmid (h) und CTRL HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CTRL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CTRL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.