CTR1 Double Nickase Plasmid (h): sc-417947-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CTR1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CTR1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CTR1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC31A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CTR1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417947-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CTR1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417947-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC31A1 kodiert den hochaffinen Kupfertransporter CTR1, ein Plasmamembranprotein, das die zelluläre Aufnahme von Kupferionen vermittelt, die für die Aktivität essenzieller kupferhaltiger Enzyme (Cuproenzyme) benötigt werden. Durch die Kontrolle der intrazellulären Kupferverfügbarkeit beeinflusst CTR1 die Redoxhomöostase, die mitochondriale Atmung und die Reaktionen auf oxidativen Stress und trägt zur Regulation metallabhängiger Signal- und Stoffwechselwege bei. Eine Störung der SLC31A1/CTR1-Funktion kann das Kupfergleichgewicht beeinträchtigen, die antioxidative Kapazität verändern und Signalwege beeinflussen, die mit Proteostase und zellulärer Lebensfähigkeit verknüpft sind. In Forschungszusammenhängen wurden fehlregulierter Kupfertransport und eine veränderte CTR1-Expression mit Phänotypen einer gestörten Metallhomöostase in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, Leberbiologie und den Stoffwechsel von Tumorzellen relevant sind.
CTR1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC31A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC31A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC31A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC31A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.