Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CTH Double Nickase Plasmid (h): sc-401134-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CTH Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CTH Double-Nickase-Plasmid (h) und CTH Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CTH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CTH: sc-374249
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CTH Double Nickase Plasmid (h) | sc-401134-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CTH Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401134-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane CTH-Gen kodiert die Cystathionin-γ-Lyase, ein pyridoxalphosphatabhängiges Enzym des Transsulfurierungswegs, das Cystathionin in Cystein, α‑Ketobutyrat und Ammoniak umwandelt und damit den Methioninstoffwechsel mit der zellulären Verfügbarkeit von Cystein verknüpft. CTH trägt außerdem zur endogenen Produktion von Schwefelwasserstoff (H2S) bei und beeinflusst dadurch die Redoxhomöostase, die mitochondriale Bioenergetik und inflammatorische Signalwege. Über seine Rolle im Cystein- und Glutathionstoffwechsel wirkt sich CTH in zahlreichen Zelltypen auf die Reaktionen auf oxidativen Stress und die Anfälligkeit für Ferroptose aus. Eine veränderte CTH-Expression oder -Aktivität wurde in experimentellen Modellen mit kardiometabolischer Dysfunktion, metabolischer Reprogrammierung von Krebszellen und neuroinflammationsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht.
CTH Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.