CTDSPL2 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-435953-LAC-2

Das murine Gen Ctdspl2 kodiert CTDSPL2, eine nukleäre Phosphatase der Haloacid-Dehalogenase-(HAD)-Familie, die an der Transkriptionsregulation beteiligt ist, indem sie Serinreste innerhalb der C-terminalen Domäne der RNA-Polymerase II dephosphoryliert und dadurch Genexpressionsprogramme beeinflusst, die mit Zellzykluskontrolle und Differenzierung verknüpft sind. CTDSPL2 ist in phosphatasevermittelten Signalnetzwerken verortet, die in Säugerzellen chromatinassoziierte Prozesse, RNA-Prozessierung und die Outputs entwicklungsbiologischer Signalwege koordinieren. Eine Fehlregulation der CTD-gerichteten Phosphataseaktivität ist breit relevant für Modelle proliferativen Stresses und veränderter Linienfestlegung, wodurch Ctdspl2 ein nützliches Ziel zur Untersuchung phosphoabhängiger Mechanismen der Transkriptionskontrolle darstellt. Gen-Editing von Ctdspl2 in Maus-Systemen ermöglicht die funktionelle Analyse nukleärer Phosphataseaktivität, die Kartierung nachgeschalteter transkriptioneller Konsequenzen mittels RNA-seq-/ChIP-basierter Assays sowie die Aufschlüsselung von Signalweg-Interaktionen in gentechnisch erzeugten Zelllinien oder in vivo in genetischen Modellen.

CTDSPL2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ctdspl2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CTDSPL2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ctdspl2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CTDSPL2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ctdspl2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.