Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) CTCF: sc-401245-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CTCF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CTCF (h) y el plásmido de doble nickasa CTCF (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CTCF. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CTCF Anticuerpo (G-8): sc-271474
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CTCF | sc-401245-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CTCF | sc-401245-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTCF codifica el factor de unión a CCCTC, una proteína multifuncional con dedos de zinc que se une al ADN y organiza la arquitectura tridimensional del genoma al establecer límites de cromatina y regular la comunicación entre potenciadores y promotores. Coopera con cohesina para formar y mantener dominios topológicamente asociados (TAD), influyendo en el control de la transcripción, el momento de replicación y las respuestas al daño del ADN. Mediante aislamiento (insulación) y bucles de largo alcance, CTCF modula programas de expresión génica específicos de linaje y el mantenimiento de estados epigenéticos. Las alteraciones en la función de CTCF o en sus paisajes de unión se asocian con una organización de la cromatina desregulada observada en trastornos del desarrollo y en diversos cánceres, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudiar la regulación génica vinculada a la topología del genoma.
CTCF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CTCF en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CTCF. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CTCF. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CTCF alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.