CT-R Double Nickase Plasmid (h): sc-404578-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CT-R Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CT-R Double-Nickase-Plasmid (h) und CT-R Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CALCR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CT-R: sc-293299
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CT-R Double Nickase Plasmid (h) | sc-404578-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CT-R Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404578-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CALCR kodiert den menschlichen Calcitoninrezeptor (CT-R), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor der Klasse B, der Calcitonin bindet und vor allem an die Gs/Adenylatcyclase-Signalübertragung koppelt, um cAMP zu erhöhen. Zusätzlich kann er – abhängig vom jeweiligen Kontext – an Phospholipase C und nachgeschaltete, calciumabhängige Signalwege koppeln. Die CT‑R‑Aktivität reguliert die Funktion von Osteoklasten und das Knochenremodeling und ist in MAPK- sowie andere Second‑Messenger-Netzwerke eingebunden, die Zelldifferenzierung und Resorptionsaktivität beeinflussen. Alternatives Spleißen kann Rezeptorisoformen mit unterschiedlichen Signaleigenschaften hervorbringen und so zu gewebespezifischen Antworten in Knochen und anderen calcitonin-antwortenden Geweben beitragen. Eine Fehlregulation der CALCR-Signalgebung wird mit Störungen des Skelettstoffwechsels in Verbindung gebracht; zudem wurden Veränderungen der Rezeptorexpression in mehreren Tumorarten beobachtet, was CALCR als mechanistisches Ziel für Studien zu Signalwegen und Zellzuständen unterstützt.
CT-R Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CALCR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CALCR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CALCR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CALCR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.