Plasmide CRISPR/Cas9 KO CstF-64T (h): sc-406358

Présentation

CSTF2T code pour CstF-64T, une sous-unité liant l’ARN du complexe « cleavage stimulation factor » (CstF), qui dirige la maturation de l’extrémité 3′ et la polyadénylation des pré‑ARNm. En influençant le choix du site de clivage et la polyadénylation alternative, CstF-64T contribue à la diversité des isoformes de transcrits, à la stabilité des ARNm et au contrôle de la traduction, avec des effets en aval sur l’état cellulaire et les programmes de différenciation. Son activité est particulièrement pertinente dans les contextes germinaux et dans des modèles où des variations de la longueur des 3′UTR remanient la régulation post‑transcriptionnelle. La dérégulation de la machinerie de clivage et de polyadénylation, y compris des voies liées à CSTF2T, est associée à de larges changements d’expression génique observés dans des phénotypes prolifératifs et d’adaptation au stress étudiés en cancérologie et en biologie du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CstF-64T (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CSTF2T dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CSTF2T, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CSTF2T à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CstF-64T.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CSTF2T pour l'étude de la signalisation de CstF-64T, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CSTF2T essentiels à la fonction de CstF-64T
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CSTF2T pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CstF-64T plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CstF-64T plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CSTF2T. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CstF-64T plasmide HDR (h) et le CstF-64T (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CSTF2T pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CSTF2T définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.