CSN8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430844

Übersicht

Cops8 kodiert CSN8, eine zentrale Untereinheit des COP9-Signalosoms, das Cullin-RING-E3-Ubiquitin-Ligasen reguliert, indem es den Neddylierungsstatus von Cullinen steuert und dadurch den ubiquitinabhängigen Proteinumsatz beeinflusst. Über diese Aktivität trägt CSN8 zur Proteostase, zum Fortschreiten des Zellzyklus, zu DNA-Schadensantworten und zu stressadaptiver Signalübertragung bei, indem es die Stabilität wichtiger regulatorischer Proteine moduliert. Eine Störung der COP9-Signalosom-Funktion wurde mit veränderter Entzündungssignalgebung, beeinträchtigter Entwicklung sowie Gewebehomöostase und dysregulierter Apoptose in Verbindung gebracht, wodurch Cops8 für mechanistische Untersuchungen von Signalwegen relevant ist, die Ubiquitin-Regulation mit zellulärer Fitness koppeln. In Mausmodellen ist eine Beeinträchtigung von CSN-Komponenten häufig mit Defekten der Wachstumskontrolle und Organfunktion assoziiert, was ihren Einsatz zur Untersuchung krankheitsrelevanter zellulärer Phänotypen unterstützt, ohne dabei therapeutische Wirkungen zu implizieren.

Das CSN8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cops8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cops8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cops8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CSN8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cops8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CSN8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cops8-Exone abzielen, die für die CSN8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cops8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CSN8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CSN8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cops8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CSN8 HDR-Plasmid (m) und CSN8 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cops8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cops8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.