Csk Double Nickase Plasmid (h): sc-400992-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Csk Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Csk Double-Nickase-Plasmid (h) und Csk Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CSK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Csk: sc-166560
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Csk Double Nickase Plasmid (h) | sc-400992-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Csk Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400992-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSK kodiert Csk, eine zytosolische Tyrosinkinase, die Src-Familien-Kinasen negativ reguliert, indem sie deren C-terminales inhibitorisches Tyrosin phosphoryliert und damit die Signalstärke stromabwärts von Immunrezeptoren, Integrinen und Wachstumsfaktorrezeptoren begrenzt. Über diese „Gatekeeper“-Funktion beeinflusst Csk Zelladhäsion und -migration, Zytoskelett-Remodeling sowie die rezeptornahe Signaltransduktion in Signalwegen wie der T‑Zellrezeptor-Signalgebung und der Fokalkontakt-Signalgebung. Veränderte CSK-Aktivität oder -Regulation kann Phosphorylierungsnetzwerke stören, die Aktivierungsschwellen von Immunzellen und proliferative Signalprogramme prägen. Eine fehlregulierte Kontrolle von Src-Familien-Kinasen im Zusammenhang mit CSK wurde mit immunvermittelten und onkogenen Signalgebungskontexten in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in mechanistischen Modellen der Signalhomöostase unterstützt.
Csk Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CSK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CSK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CSK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CSK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.