CS1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401906-ACT

SLAMF7 (CS1) ist ein an der Zelloberfläche lokalisiertes Immunrezeptorprotein der SLAM-Familie, das überwiegend auf natürlichen Killerzellen sowie auf Subpopulationen der B-Zell-Linie und Plasmazellen exprimiert wird und dort die Bildung der immunologischen Synapse sowie Effektormechanismen moduliert. Über homotypische Interaktionen und adaptorabhängige Signalübertragung beeinflusst CS1 Aktivierungsschwellen, die Zytokinsekretion und zytotoxische Antworten und ist in Signalwege eingebunden, die die Kommunikation von Lymphozyten und die Immunüberwachung steuern. Eine dysregulierte SLAMF7-Expression wurde im Kontext hämatologischer Malignome mit verändertem Verhalten lymphoider Zellen und Tumor–Immun-Interaktionen in Verbindung gebracht, wodurch SLAMF7 ein nützlicher Marker und funktioneller Knotenpunkt zur Untersuchung der Immunregulation ist. Die experimentelle Modulation von SLAMF7 unterstützt mechanistische Studien zur Aktivierung von Immunzellen, zu Rezeptor-Signalnetzwerken und zu mikro­umgebungsabhängigen Phänotypen.

CS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLAMF7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLAMF7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLAMF7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CS1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLAMF7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CS1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CS1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLAMF7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.