cryptdin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419984

Übersicht

Defa3 kodiert Cryptdin 3, ein von Paneth-Zellen stammendes α-Defensin, das zur angeborenen Immunabwehr im Dünndarm der Maus beiträgt, indem es mikrobielle Membranen direkt angreift und die Zusammensetzung der Darmmikrobiota mitprägt. Als Bestandteil der Biologie antimikrobieller Peptide ist Cryptdin 3 an der Aufrechterhaltung der epithelialen Barriere und der mukosalen Immunhomöostase beteiligt – zusammen mit Mustererkennungs- und inflammatorischen Signalwegen. Eine veränderte Defensinproduktion der Paneth-Zellen wurde mit Dysbiose und intestinalen Entzündungen in Verbindung gebracht, wodurch Defa3 für mechanistische Studien zu Wirt–Mikroben-Interaktionen relevant ist. Eine Perturbation von Defa3 ist zudem nützlich, um zu untersuchen, wie antimikrobielle Peptide die Kolonisierungsresistenz gegenüber Bakterien und epitheliale Stressantworten beeinflussen.

Das cryptdin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Defa3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Defa3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Defa3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die cryptdin 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Defa3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der cryptdin 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Defa3-Exone abzielen, die für die cryptdin 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Defa3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom cryptdin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom cryptdin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Defa3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das cryptdin 3 HDR-Plasmid (m) und cryptdin 3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Defa3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Defa3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.