Plasmide Double Nickase (m) Cryopyrin/NALP3/NLRP3: sc-432122-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Cryopyrin/NALP3/NLRP3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase (m) et le plasmide Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Nlrp3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Cryopyrin/NALP3/NLRP3 | sc-432122-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Cryopyrin/NALP3/NLRP3 | sc-432122-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Nlrp3** code la cryopyrine (NALP3/NLRP3), un récepteur cytosolique de reconnaissance des motifs qui nucléé l’inflammasome NLRP3 en réponse à divers signaux de danger tels que l’ATP, des particules cristallines, le stress mitochondrial et les flux ioniques. L’assemblage de l’inflammasome favorise l’activation de la caspase-1 dépendante d’ASC, entraînant la maturation d’IL-1β et d’IL-18 et déclenchant une pyroptose médiée par la gasdermine D, reliant ainsi la détection innée à la libération de cytokines inflammatoires. La signalisation NLRP3 s’articule avec l’amorçage par NF-κB, les voies impliquant les ROS et les dommages lysosomaux, ainsi qu’avec des programmes plus larges d’activation myéloïde. Une activité NLRP3 dérégulée est largement utilisée comme modèle mécanistique d’inflammation stérile et de phénotypes auto-inflammatoires pertinents dans des contextes métaboliques, neuro-inflammatoires et de lésions tissulaires.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nlrp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nlrp3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nlrp3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nlrp3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.