Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400270-NIC

ヒトNLRP3（クリオピリン／NALP3）は細胞質に存在するパターン認識受容体であり、イオンフラックス、ミトコンドリアストレス、リソソーム損傷など、病原体関連および危険関連の多様な刺激に応答してNLRP3インフラマソームの形成（核形成）を誘導します。活性化されると、NLRP3はASCおよびプロカスパーゼ-1と会合してカスパーゼ-1の活性化を駆動し、IL-1βおよびIL-18の成熟を促進するとともに、ガスデルミンD依存性のパイロトーシスを引き起こします。このシグナル伝達軸は自然免疫の制御における中核を成し、代謝性および炎症性ストレスを下流のサイトカイン発現プログラムへと結び付けます。NLRP3活性の破綻やその遺伝子バリアントは自己炎症性症候群と関連し、痛風、動脈硬化、神経炎症、ならびに代謝性疾患モデルで研究される炎症機構にも寄与します。

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NLRP3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NLRP3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NLRP3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NLRP3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。