Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRSP77: sc-402693-ACT

MED17 code CRSP77, une sous-unité centrale du complexe Mediator humain, qui relie des facteurs de transcription spécifiques de séquence à l’ARN polymérase II afin de coordonner l’initiation de la transcription et la régulation des gènes dépendante du promoteur. Grâce à l’intégration, dépendante de Mediator, de signaux en entrée, CRSP77 contribue au contrôle des programmes du cycle cellulaire, de la différenciation et des réponses transcriptionnelles au stress. La dérégulation de composants de Mediator, dont MED17, a été associée à une altération de l’homéostasie transcriptionnelle globale et a été étudiée dans le contexte de mécanismes de maladies neurodéveloppementales et prolifératives. Par conséquent, MED17/CRSP77 est fréquemment étudié pour comprendre comment des co‑régulateurs transcriptionnels façonnent des réseaux d’expression génique spécifiques de voies de signalisation.

CRSP77 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MED17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRSP77 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MED17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MED17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRSP77. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MED17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRSP77 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRSP77 dans les cellules tumorales présentant une expression de MED17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.