CRSP130 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406593

Übersicht

MED23 kodiert CRSP130, eine zentrale Untereinheit des Mediator-Komplexes, der sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der RNA-Polymerase II koppelt und so die Transkriptionsinitiation sowie signalabhängige Programme der Genexpression koordiniert. CRSP130 trägt dazu bei, regulatorische Signale aus entwicklungsbezogenen und stressantwortenden Signalwegen zu integrieren, um die Promotoraktivität und die chromatinassoziierte Kontrolle der Transkription zu modulieren. Über die Mediator-abhängige Regulation umfangreicher Gen-Netzwerke wurde MED23 in der Literatur mit veränderten Zuständen von Zellwachstum und Differenzierung sowie mit fehlregulierten Transkriptionsausgaben in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht. Aufgrund seiner zentralen Rolle in der Transkriptionsschaltkreise ist MED23 ein nützliches Ziel, um die Kommunikation von Signalwegen zu Promotoren und die Abhängigkeit von Transkriptionsfaktoren in menschlichen Zellmodellen zu untersuchen.

Das CRSP130 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MED23-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MED23-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MED23 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CRSP130-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MED23-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CRSP130-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MED23-Exone abzielen, die für die CRSP130-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MED23-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CRSP130 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CRSP130 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MED23-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CRSP130 HDR-Plasmid (h) und CRSP130 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MED23-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MED23-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.