CRSP130 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406593

Descripción general

MED23 codifica CRSP130, una subunidad central del complejo Mediator que acopla factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II, coordinando el inicio de la transcripción y programas de expresión génica dependientes de señales. CRSP130 ayuda a integrar señales regulatorias procedentes de vías del desarrollo y de respuesta al estrés para modular la actividad de los promotores y el control transcripcional asociado a la cromatina. Mediante la regulación dependiente de Mediator de amplias redes génicas, MED23 se ha vinculado en la literatura con estados alterados de crecimiento y diferenciación celular y con salidas transcripcionales desreguladas observadas en múltiples contextos de enfermedad. Su papel central en los circuitos de transcripción convierte a MED23 en una diana útil para diseccionar la comunicación vía‑promotor y la dependencia de factores de transcripción en modelos de células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CRSP130 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MED23 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MED23 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MED23 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CRSP130.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MED23 para la investigación de la señalización de CRSP130, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MED23 críticos para la función de CRSP130
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MED23 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CRSP130 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CRSP130 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MED23. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CRSP130 (h) y el plásmido HDR CRSP130 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MED23 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MED23 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.