CRP2 Double Nickase Plasmid (h): sc-409601-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CRP2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CRP2 Double-Nickase-Plasmid (h) und CRP2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CSRP2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CRP2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-409601-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CRP2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409601-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSRP2 kodiert das cystein- und glycinreiche Protein 2 (CRP2), einen LIM-Domänen-haltigen, aktinbindenden Regulator, der in glatter Muskulatur und vaskulären Zelltypen besonders stark exprimiert wird. CRP2 lokalisiert zum Zytoskelett und in den Zellkern, wo es die Aktindynamik mit Transkriptionsprogrammen koordiniert, die Zelladhäsion, Migration und Differenzierung prägen. Es ist an der Umgestaltung des Zytoskeletts und an Mechanotransduktions-Signalwegen beteiligt und beeinflusst die Genexpression über Interaktionen mit LIM-Domänen-Partnern und transkriptionellen Koregulatoren. Eine veränderte CSRP2/CRP2-Expression wurde in unterschiedlichen Kontexten beschrieben, darunter vaskuläres Remodeling, das myofibroblastenbezogene Verhalten bei Fibrose sowie Tumorzellmotilität, was seine Untersuchung bei krankheitsrelevanten Zellzustandsübergängen nahelegt.
CRP2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CSRP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CSRP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CSRP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CSRP2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.