Plasmide Double Nickase (h) CRP: sc-401767-NIC

La protéine C‑réactive (CRP) est une molécule de reconnaissance des motifs appartenant à la famille des pentraxines, produite principalement par les hépatocytes en réponse à des cytokines pro‑inflammatoires, en particulier l’IL‑6, et circulant comme un important réactif de phase aiguë. La CRP se lie à la phosphocholine et à d’autres ligands présents à la surface des cellules endommagées et des microbes, favorisant l’opsonisation et l’activation de la voie classique du complément via C1q. Par ces mécanismes de l’immunité innée, la CRP fait le lien entre la signalisation inflammatoire et l’élimination médiée par le complément, et module les interactions avec les récepteurs Fcγ des cellules myéloïdes. Les variations génétiques et l’expression dérégulée de la CRP sont largement étudiées dans le contexte de l’inflammation systémique et de phénotypes cardiométaboliques et auto-immuns, ce qui en fait un marqueur moléculaire clé et un régulateur majeur en biologie de l’inflammation.

CRP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.