CRISP-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417129

Descripción general

CRISP3 codifica la proteína secretoria rica en cisteína 3 (CRISP-3), un miembro secretado de la superfamilia CAP, enriquecido en tejidos exocrinos y en compartimentos relacionados con el sistema inmunitario, como los gránulos de neutrófilos. CRISP-3 participa en interacciones extracelulares proteína–proteína que influyen en las respuestas inmunitarias innatas, la secreción epitelial y la señalización regulada por proteasas dentro de los microambientes tisulares. Se ha descrito una expresión alterada de CRISP3 en diversas afecciones asociadas a la inflamación y en múltiples contextos de cáncer, lo que respalda su uso como gen vinculado a biomarcadores en estudios de biología tumoral y de la comunicación entre el sistema inmunitario y el epitelio. En modelos celulares, la perturbación de CRISP-3 se utiliza comúnmente para investigar programas de secreción, vías sensibles al estrés y la remodelación del microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CRISP-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CRISP3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CRISP3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CRISP3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CRISP-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CRISP3 para la investigación de la señalización de CRISP-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CRISP3 críticos para la función de CRISP-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CRISP3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CRISP-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CRISP-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CRISP3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CRISP-3 (h) y el plásmido HDR CRISP-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CRISP3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CRISP3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.