CRISP-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419035

Descripción general

Crisp1 codifica la proteína secretora rica en cisteína 1 (CRISP-1), un miembro de la superfamilia CAP (proteínas secretoras ricas en cisteína/antígeno 5/relacionadas con la patogénesis 1) que se expresa en niveles altos en el tracto reproductor masculino y se secreta hacia la luz del epidídimo. En el ratón, CRISP-1 se asocia con los espermatozoides durante la maduración epididimaria y contribuye a las interacciones entre gametos, incluida la regulación de la capacitación espermática y su participación en la unión espermatozoide–zona pelúcida y en eventos relacionados con la fecundación. A nivel celular, CRISP-1 se vincula con la biología de la vía secretora y con interacciones de proteínas extracelulares que modulan las propiedades de membrana y de señalización de los espermatozoides. La desregulación de Crisp1 es relevante para estudios de fenotipos de fertilidad masculina y de la función del tracto reproductor, y también se utiliza como modelo para investigar los roles de las proteínas de la familia CAP en contextos mucosales e inmunitarios.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CRISP-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Crisp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Crisp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Crisp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CRISP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Crisp1 para la investigación de la señalización de CRISP-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Crisp1 críticos para la función de CRISP-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Crisp1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CRISP-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CRISP-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Crisp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CRISP-1 (m) y el plásmido HDR CRISP-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Crisp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Crisp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.